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高效液相色譜法分析頭孢硫脒


本品為(6R,7R)-3[(乙?;┘谆鵠-7-[α-(N,N’-二異丙基脒螺旋進(jìn)料器硫基)-乙酰胺基]8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸內(nèi)銨鹽。按無(wú)水物計(jì)算,含C19H28N4O6S2不得少于94.0%。
【性狀】 本品礦用皮帶機(jī)為白色或類(lèi)白色結(jié)晶性粉末;幾乎無(wú)臭,有引濕性。
本品在水中極易溶解,在乙醇制砂機(jī)設(shè)備中微溶,在丙酮、氯仿或乙醚中不溶。
比旋度 取本品,精密稱(chēng)定,加水溶解振動(dòng)電機(jī)并制成每1ml中含10mg的溶液,依法測(cè)定(中國(guó)藥典2000年版二部附錄Ⅵ E),比旋度為135°~ 145°。
【鑒別】 (1)在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中,供試品主峰的保留時(shí)間應(yīng)與頭孢硫脒對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致。斜槽輸送機(jī)
(2)取本品適量,加水溶解并制成每1ml中約含20mg的溶液,作為供試品溶液;另取頭孢硫脒對(duì)照品適量,加水溶解并制成每1ml中約含20mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;取對(duì)照品溶液和供試品溶液等量混合,作為混合溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VB)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各1μl,分別點(diǎn)于同一硅膠移動(dòng)帶式輸送機(jī)G薄層板[取硅膠G2.5g,加含1%羧甲基纖維素鈉的磷酸鹽緩沖液(pH5.8)適量,調(diào)漿制板,經(jīng)105℃活化1小時(shí),放入干燥器中備用]上,以新鮮配制的甲醇-異丙醇-磷酸鹽緩沖液(pH5.8)(7:2:1)為展開(kāi)劑,展開(kāi)后,晾干,于100℃加熱30分鐘,置碘蒸氣中顯色檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同,混合溶液應(yīng)顯一個(gè)斑點(diǎn)。
(3)本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照品的圖譜一致 (中國(guó)藥典螺旋輸送器2000年版二部附錄Ⅳ C)。
以上(1)電磁振動(dòng)篩機(jī)、(2)兩項(xiàng)可選做一項(xiàng)。
重型板式給料機(jī)【檢查】 結(jié)晶性 取本品少許,依法檢查(中國(guó)藥典2000年版二部附錄Ⅸ D),應(yīng)符合規(guī)定。
酸度 取本品,加水制成每1 ml中含0.1g的溶液,依法測(cè)定(中國(guó)藥典2000年版二部附錄Ⅵ H給料機(jī)),pH值應(yīng)為4.0~6.0。
溶液的澄清度與顏色取本品5份,各0.6g分別加水5ml溶解后,溶液應(yīng)澄清無(wú)色;如顯渾濁,與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液(中國(guó)藥典2000年版二部附錄ⅨB)比較,均不得更濃;如顯色,與黃色或黃綠色6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液(中國(guó)藥典2000年版二部附錄Ⅸ A 第一法)比較,均制砂機(jī)生產(chǎn)線(xiàn)不得更深。
水分 輸送帶取本品,照水分測(cè)定法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄Ⅷ M第一法A)測(cè)定,含水分不得過(guò)1.5%。
有關(guān)物質(zhì)取本品適量,加流動(dòng)相制成每1ml中含0.5mg的溶液作為供試品溶液,精密量取適量,加流動(dòng)相稀釋成管鏈?zhǔn)椒垠w輸送機(jī)每1ml中含5μg的溶液作為對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定。量取對(duì)照溶液10μl,注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度,使主成分拖尾峰(tailingpeak)。前者少見(jiàn)。>液相輸送帶色譜色譜峰的峰高約為滿(mǎn)量程的20%,再準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各10ml,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如顯雜質(zhì)峰,單個(gè)雜質(zhì)峰的基線(xiàn)構(gòu)成之面積稱(chēng)峰面積。A=×σ×h=2.507σh=1.064Wh/2h>峰面積不得大于對(duì)照溶液主成分峰的峰面積(1.0%),各雜質(zhì)峰峰面積總和(小于對(duì)照溶液主成分峰峰面積1/10的雜質(zhì)峰不計(jì))不得大于對(duì)照溶液石料破碎主成分峰峰面積的2.5倍(2.5%)。
二氯甲烷 照氯相色譜法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄V E) 測(cè)定,
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷基共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(30m×0.53mm,涂層厚3.0μm),柱溫為30℃(每次進(jìn)樣測(cè)定后,柱溫升至100℃維持8分鐘)。稱(chēng)取二氯甲烷、丙酮和乙醇各適量,加水制成每1ml中各含0.4mg的溶液,作為分離度溶液,量取1μl,注入氣相色譜儀。二氯甲烷峰與乙醇峰、丙醇峰的分離度均應(yīng)符合規(guī)定。
取二氯甲烷適量,精密稱(chēng)定,加水定量稀釋制成每1ml中含40m g的溶液,作為對(duì)照溶液;另取本品約0.1g,精密稱(chēng)定,精密加水2ml,振搖使溶解,作為供試品溶液。精密量取上述兩種溶液各1μl,注入氣相色譜儀,記錄色譜圖。供試品溶液的色譜圖中如顯與二氯甲烷對(duì)照溶液相應(yīng)的色譜峰,按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算,含二氯甲烷的量不得過(guò)0.06%。
細(xì)菌內(nèi)毒素 取本品,依法檢查(中國(guó)藥典2000年版二部附錄Ⅺ E),每1mg頭孢硫脒中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.075EU。
無(wú)菌 取本品,分別加入100ml 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中使溶解,用薄膜過(guò)濾法處理后,依法檢查(中國(guó)藥典2000年版二部附錄ⅪH),應(yīng)符合規(guī)定。
【含量測(cè)定】 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄Ⅴ D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以磷酸鹽緩沖液(取無(wú)水磷酸氫二鈉2.76g,枸櫞酸1.29g,加水溶解并稀釋成1000ml)-乙腈(80:20)為流動(dòng)相;檢測(cè)波
長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按頭孢硫脒峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;取頭孢硫脒對(duì)照品適量,加0.1mol/l鹽酸溶液溶解并稀釋成每1ml中含頭孢硫脒2mg的溶液,置80℃水浴中加熱10分鐘,放冷,濾過(guò),取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀,頭孢硫脒峰與其降解產(chǎn)物峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。
測(cè)定法 取本品適量,精密稱(chēng)定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含頭孢硫脒0.1mg的溶液,取10μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取頭孢硫脒對(duì)照品適量,同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中C19H28N4O6S2的含量。

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