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高效液相色譜儀應(yīng)用移動破碎機舉例
例1.稠振動清理篩環(huán)芳烴分析(環(huán)境氣體分析)
樣 品：含六苯并苯等8粉體輸送設(shè)備種稠環(huán)芳烴的混合物
色譜儀錘式反擊破碎機：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站
檢測器：UV紫制沙設(shè)備外檢測器，340nm
色譜柱：倉壁振動器C18鍵合相(ODS-224),5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm
過濾篩流動相：甲醇-二氯甲烷(8:2)混合溶劑
流 速：1mL/mi煤礦皮帶輸送機n
鏈斗式輸送機進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分在25min管狀輸送機之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分出峰順序為：六苯并苯，二苯二萘嵌苯，三苯二萘嵌苯，苯萘并二萘嵌苯，四苯二萘嵌苯，萘六苯并苯，二苯萘并二萘嵌苯，苯菲并五苯。
例2.磺胺分析(藥煤礦輸送機物分析)
樣 品：磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基異噁唑和甲氧芐氨鏈條輸送機嘧啶的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，7振動給料裝置40色譜數(shù)據(jù)處理機
檢測器：UV 481型鏈斗提升機紫外檢測器，波長240nm
色譜柱：μ-Bondapak C18 , 5μm，柱長25 cm，柱徑4.6 超細破碎機mm
流動相：由KH2PO4(0.05mol/L)和Na2HPO4(0.05 mol/L)以及MeOH所組成，其用量比例為200:10:165，
流 速：1mL/min
進 樣：10μL
結(jié) 果：所有組分在6min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分出峰順序為：磺胺保留時間為2.60 min, 磺胺嘧啶保留時間為3.18 min、磺胺甲基異噁唑保留時間為4.33 min,甲氧芐氨嘧啶保留時間為5.19min。
例3.銀杏內(nèi)酯分析(藥物分析)
樣 品：含銀杏苦內(nèi)酯等4種物質(zhì)的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀
配有570自動進樣器，Rheadyane 77251進樣閥，HP化學(xué)工作站
檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為91℃，氮氣流速為2.75L/min
色譜柱：Platinum OPS，5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm
流動相：水:甲醇:四氫呋喃 = 75:20:10
流 速：1mL/min
進 樣：10μL
結(jié) 果：所有組分在15min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為銀杏苦內(nèi)酯C, 峰2為白果內(nèi)酯, 峰3銀杏苦內(nèi)酯A, 峰4為銀杏苦內(nèi)酯B。
例4.脂肪酸甲酯分析(藥物分析)
樣 品：含5種脂肪酸甲酯的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站
檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為45℃，氮氣流速為1.5L/min
色譜柱：Silver Impregnated Ion-Exchange ,柱長25cm，柱徑4.6mm
流動相：乙腈:甲醇 = 2:98
流 速：0.75mL/min
進 樣：10μL
結(jié) 果：所有組分在10min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為C18：0脂肪酸甲酯，峰為C18：1脂肪酸甲酯，峰3為C18：2脂肪酸甲酯，峰4為C18：3脂肪酸甲酯，峰1為C20：4脂肪酸甲酯。
例5.茶堿分析(茶葉)
樣 品：含茶堿等三種物質(zhì)的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站
檢測器：UV紫外檢測器，280nm
色譜柱：Micro μBondapak C18 ，8μm，柱長25 cm，柱徑4.6 mm
流動相：二甲基二酰胺:甲醇:醋酸:水 = 23.5:1:0.5:75(v/v)
流 速：1mL/min
進 樣：10μL
結(jié) 果：所有組分8min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為可可堿，峰2為茶堿，峰3為咖啡堿。
例6.脂肪酸直接分析
樣 品：未經(jīng)衍生處理的亞麻酸等6組分的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵，色譜工作站
檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為65℃，氮氣流速為2.0L/min
色譜柱：AlltimaTM C18 ，5μm，柱長25cm，柱徑2.1mm
流動相：A為水，B為乙腈
梯 度 時間 0min 10min 15min 20min
A 13% 20% 20% 5%
B 77% 80% 80% 95%
流 速：0.4mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分20min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為亞麻酸，峰2為肉豆蔻酸，峰3為亞油酸，峰4為棕櫚酸，峰5為油酸，峰6為硬脂酸。
例7：氨基酸衍生物分析(食品分析)
樣 品：22種氨基酸的苯基乙酰硫脲混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，梯度洗脫裝置，色譜工作站
檢測器：UV紫外檢測器，波長254nm
色譜柱：柱長25cm，柱徑0.46cm Zorbax ODS柱(Dupont)
流動相：A液為0.01mol/L的NaAc, pH =4.5
B液為CH3CN
梯 度：0min～6min B/A = 24/76～42/58(v/v)
6min～14min B/A = 42/58(v/v)
14min～20min B/A = 24/76(v/v)
流 速：1mL/min
進 樣：自動進樣器進樣10μL
結(jié) 果：所有組分在20min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分出峰順序為：峰1為ASP，峰2為GLU，峰3為ASN，峰4為SER，峰5為GLN，峰6為THR，峰7為GLY，峰8為MET·SO2 ,峰9為HYP, 峰10為ALA，峰11為TYR，峰12為HIS，峰13為CYS(CH2)，峰14為VAL，峰15為MET，峰16為PRO，峰17為TRP，峰18為LYS，峰19為PHE，峰20為ILE，峰21為LEU，峰22為ARG。
例8.氨基酸直接分析
樣 品：12種未衍生氨基酸混合物溶液(1mMol/L)
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵
配有二極管陣列檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器和化學(xué)工作站
檢測器：500型ELSD蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為95℃，氮氣流速2.5L/min
色譜柱：Alltima C18 , 5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm
流動相：A為含0.1% TFA的水
B為含0.1% TFA的乙腈
梯 度: 時間 0min 5min 20min
A液 100% 100% 60%
B液 0% 0% 40%
流 速：0.6mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分在25min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為絲氨酸，峰2為賴氨酸，峰3為谷氨酸，峰4為精氨酸，峰5為脯氨酸，峰6為纈氨酸，峰7為甲硫氨酸，峰8為酪氨酸，峰9為異亮氨酸，峰10為亮氨酸，峰11為苯丙氨酸，峰12為組氨酸。
例9.糖類分析(食品分析)
樣 品：含果糖等6種糖類物質(zhì)的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵，色譜工作站
檢測器：Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為100℃，氮氣流速為2.2L/min。
色譜柱：Absorbosphere, NH2 ，柱長25cm，柱徑4.6mm
流動相：A為乙腈，B為水
梯 度：時間 0min 20min
A 85% 75%
B 15% 25%
流 速：1.5mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分在24min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序依次為：峰1為果糖，峰2為葡萄糖，峰3為蔗糖，峰4為麥芽糖，峰5為乳糖，峰6為棉籽糖。
例10.嘌呤分析(藥物分析)
樣 品：取1mL血漿加入200μL的1.98mol/L的高氯酸(GR)，再加入600μL蒸餾水和200μL的1.47mol/L的別嘌呤醇(內(nèi)標(biāo))，用旋轉(zhuǎn)混合器振搖10s于1200g離心10min，取上層清液備分析用。
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站
檢測器：UV紫外檢測器，254nm
色譜柱：μBondapsk C18 ，10μm，柱長30cm，柱徑3.9mm
流動相：0.02mol/L的磷酸二氫鉀，pH = 2.2
流 速：2.0mL/min
進 樣：10μL
結(jié) 果：所有組分在12min之內(nèi)全部流出，各組分分離完全，保留時間依次為：尿嘌呤為3.18min(峰1)，腺嘌呤為3.21 min(峰2)，次黃嘌呤為3.90 min(峰3)，5-羥基吡嗪酸為4.75min(峰4)，5-羥基吡嗪胺為5.31 min(峰5)，黃嘌呤為5.90 min(峰6)，吡嗪酸為7.35min(峰7)，內(nèi)標(biāo)別嘌呤醇為8.53min(峰8)，吡嗪胺為9.57min(峰9)。
例11.植物甾醇分析(生物制藥)
樣 品：含β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇和膽固醇的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站
檢測器：Alltech 2000型 ELSD蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為70℃，氮氣流速1.6L/min
色譜柱：Supecol Discouery C18 , 5μm，柱長25cm ，柱徑4.6mm
流動相：甲醇
流 速：1mL/min
進 樣：10μL
結(jié) 果：所有組分在19min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為菜籽甾醇保留時間13.70min，峰2為膽固醇保留時間14.62 min，峰3為豆甾醇保留時間15.45min，峰4為菜油甾醇保留時間15.97min，峰5為β-谷甾醇保留時間17.05min。
例12.甾族化合物分析
樣 品：含孕酮等4種物質(zhì)的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵，色譜工作站
檢測器：Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為135℃，氮氣流速為1.2L/min。
色譜柱：Hyperil C18 ,5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm
流動相：甲醇:水 = 70:30
流 速：1.2mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分在12min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為氫化可的松，峰2 為強的松，峰3為睪酮，峰4為孕酮。
例13.皮質(zhì)醇分析
樣 品：含皮質(zhì)醇等5種物質(zhì)的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站
檢測器：熒光檢測器，流動池30μL
激發(fā)波長370nm ,檢測波長480nm，狹縫均為20nm
色譜柱：Finepak C18 ，10μm，柱長25cm，柱徑4.6mm
流動相：甲醇:水 = 50:100(v/v)
流 速：0.8 mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分70min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為皮質(zhì)醇保留時間15.8min，峰2為β-Methasone保留時間20.0min，峰3為四氫皮質(zhì)酮保留時間22.5min，峰4為四反皮質(zhì)醇保留時間32.5 min，峰5為四氫-11-脫氧皮質(zhì)醇保留時間65.8min。
例14.膽固醇分析
樣 品：含膽固醇等6組分的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站
檢測器：ELSD美國Alltech MKⅢ蒸發(fā)激光散射檢測器
漂移管溫度為65℃，氮氣流速為2.0L/min。
色譜柱：Allsphere Silica ，3μm，柱長10cm，柱徑4.6mm
流動相：A為離子對試劑，B為正己烷，C為水
梯 度：時間 0min 7min 15min
A 58% 52% 52%
B 40% 40% 40%
C 2% 8% 8%
流 速：1.25mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分在13min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為膽固醇，峰2為棕櫚酸，峰3為磷脂酰乙醇胺，峰4為磷脂酰絲氨酸，峰5為磷脂酰膽堿，峰6為神經(jīng)鞘磷脂。
例15.磷脂分析(生物)
樣 品：含磷脂酰肌醇等4種物質(zhì)混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵，色譜工作站
檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為120℃，氮氣流速為2.7L/min。
色譜柱：Rosil NH2 ，5μm，柱長15cm，柱徑4.6mm
流動相：A為無水乙醇，B為0.2mol/L的草酸溶液
梯 度：時間 0min 15min 30min 30.1min 35.1min
A 95% 85% 85% 95% 95%
B 5% 15% 15% 5% 5%
流 速：1.5mL/min
進 樣：10μL
結(jié) 果：所有組分在35min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為磷脂酰乙醇胺, 峰2為磷脂酰絲氨酸, 峰3為磷脂酰膽堿, 峰4為磷脂酰肌醇。
例16.多肽分析(生物)
樣 品：含G-Y等3種多肽物質(zhì)的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站
檢測器：ELSD美國Alltech MKⅢ蒸發(fā)激光散射檢測器
漂移管溫度為110℃，氮氣流速為2.19L/min
色譜柱：AlltimaTM C18 ，5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm
流動相：0.05%TFA水溶液:乙腈 = 65:35
流 速：0.6mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分在5min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為G-Y，峰2為G-L-Y，峰3為K-D。
例17.維生素分析(食品分析)
樣 品：含維生素A等5種物質(zhì)的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有工作站
檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為70℃，氮氣流速為2.0L/min
色譜柱：Adsorbosphere C18 ，5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm
流動相：甲醇:乙醇 = 97:3
流 速：1mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分在21 min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為維生素A，峰2為維生素D2，峰3為維生素D3，峰4為維生素E，峰5為維生素K1 。
例18.抗菌素分析(藥物)
樣 品：含有紅霉素等5種抗菌素的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀
配有570自動進樣器，Rheadyane 77251進樣閥，HP化學(xué)工作站
檢測器：2000型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為95℃，氮氣流速為2.0L/min
色譜柱：AlltimaTM C18 ,5μm，柱長15cm，柱徑4.6mm
流動相：A為0.2% 五氟丙酸, B為甲醇
梯 度：時間 0min 5min
A/B 55%/45% 35%/65%
流 速：1mL/ min
進 樣：10μL
結(jié) 果：所有組分在6min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為紅霉素，峰2為鏈霉素，峰3為托布霉素，峰4為阿米卡星，峰5為新霉素。
例19.無活菌素分析(生物制藥)
樣 品：含無活菌素等5種物質(zhì)的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀
配有570自動進樣器，Rheadyane 77251進樣閥，HP化學(xué)工作站
檢測器：2000型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為96℃，氮氣流速為2.9L/min
色譜柱：AlltimaTM C18 ,5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm
流動相：THF:水 = 60:40
流 速：1mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分在20min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為無活菌素，峰2為單活菌素，峰3為二活菌素，峰4為三活菌素，峰5為四活菌素。
例20.非離子型去垢劑分析(化學(xué)化工)
樣 品：3種非離子型去垢劑物質(zhì)的混合物
色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站
檢測器：2000型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器
漂移管溫度為65℃，氮氣流速為1.9L/min
色譜柱：Alltech EconosphereTM C18 ,5μm，柱長15cm，柱徑4.6mm
流動相：甲醇:水 = 90:10
流 速：0.8mL/min
進 樣：20μL
結(jié) 果：所有組分在5 min之內(nèi)全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為n-葵基-β-D-吡喃葡萄糖甙，峰2為n-十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖甙，峰3為n-辛葵基-β-D-吡喃葡萄糖甙。